Влияние и взаимосвязь повышенного уровня афамина и липидной дисрегуляции в семенной и фолликулярных жидкостях на бесплодие у женщин и мужчин

Росио Нуньес-Калонже * 1, Сусана Кортес1, Леонор Ортега1, Луис Мигель Гутьеррес Гонсалес2, Роман Киреев3
1 Репродуктивная функция, Клиника Tambre, Мадрид, Испания
2 Биохимия, Университет Альфонсо эль Сабио, Мадрид, Испания
3 Биохимия, Исследовательский институт здоровья, Мадрид, Испания

Введение. Гликопротеин плазмы – афамин ранее был идентифицирован и описан как альтернативный белок-носитель витамина Е в экстраваскулярных жидкостях, таких как плазма, яичниковые фолликулярные и семенные жидкости. Повышенная экспрессия человеческого афамина у трансгенных мышей FVB/N продемонстрировала более высокие концентрации общего холестерина и триглицеридов в плазме по сравнению с фенотипом животных, наиболее часто встречающийся в природной популяции, по признаку пола. Однако на сегодняшний день, по нашим данным, не проводились исследования, устанавливающие связь между уровнями концентрации афамина и бесплодием у женщин и мужчин.

Целью данного исследования является проведение оценки концентрации афамина в сыворотке крови, семенной и фолликулярной жидкости бесплодных мужчин и женщин по сравнению со здоровыми пациентами – участниками исследования, субъектами контрольной группы и изучение взаимосвязи между одиночными нуклеотидными полиморфизмами (SNPs) 5′-концевой нетранслируемой областью (5`-UTR) гена афамина и бесплодием.

Данные и методы. В данное исследование были включены образцы спермы 20 пациентов, посещающих лабораторию андрологии в Клинике Tambre, которые были разделены на две группы по критериям ВОЗ 2010: астенозооспермия (Asz) (n=6) и олигоастенотератозооспермия (ОАТ-синдром) (OATz) (n=14). Контрольная группа состояла из 39 мужчин с нормальными параметрами спермы. Фолликулярная жидкость (ФЖ) была получена у 14 пациентов в возрасте 35 лет, у пациентов с низким уровнем ответа (НУ) (≤ 5 ооцитов), получавших ЭКО, и у 40 здоровых фертильных доноров ооцитов, с одинаковым протоколом контролируемой стимуляции яичников. Количественную концентрацию афамина определяли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) ELISA по принципу непрямого неконкурентного ИФА «сэндвич». Проводили анализ проб периферической крови на наличие специфических последовательностей гена Афамин (AФM) с помощью ПЦР – амплификации с целью последующего прямого секвенирования. Уровни общего холестерина, триглицеридов (ТГ) и неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) определялись с применением готовых коммерческих наборов реактивов. Для проверки нормальности распределения переменных использовали tкритерий Стьюдента для несвязных и неравных по численности выборок. Для сравнения разницы между тремя группами использовали односторонний дисперсионный анализ (ANOVA).

Результаты. Субъекты с низкой подвижностью сперматозоидов и/или концентрацией сперматозоидов имели более высокие медианные концентрации сперматозоидов (18,9±2,9 нг/мг белков) и концентрации афамина в сыворотке крови (24,1±4,0 нг/мг белков) чем те, у кого отсутствуют изменения спермы (10,6±1,4 нг/мг белков) (p0,02); (15,6±1,4 нг/мг белков) (p0,002). В группе пациентов уровни триглицеридов (ТГ) и неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в семенных жидкостях и триглицеридов (ТГ) в плазме значительно повышались по сравнению с контрольной группой. Концентрация Афамин (AФM)  была значительно выше в фолликулярной жидкости (ФЖ) у пациентов с низким уровнем ответа (НУ)  (20,4±2,3 нг/мг белков), чем у контрольной группы (13,2±0,4 нг/мг белков) (p0,05). Статистически значимых различий между уровнями афамина в сыворотке молодых женщин с  низким уровнем ответа (НУ) (17,2±1,5 нг/мг белков) и донорами ооцитов (14,4±0,5 нг/мг белков) не наблюдалось. Концентрации фолликулярной жидкости, неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК), триглицеридов (ТГ) и сыворотки НЭЖК были значительно выше у молодых женщин с низким уровнем ответа (НУ) по сравнению с донорами ооцитов. Новая трансверсия (A/T) (позиция 4:73481093) была идентифицирована у пациента с олигоастенотератозооспермией (ОАТ-синдром) и была связана с высокими уровнями афамина в плазме и семенной жидкости. Полипептиды с одним нуклеотидом за один оборот rs115041046, rs371710441, rs35680917, rs72856618 AФM были полиморфными как у пациентов, так и в контрольных группах. Однако наши данные показали, что генотип AG (rs115041046) был выше среди пациентов по сравнению с контрольной группой, а генотип TA (rs371710441) был преобладающим в группе пациентов мужского пола.

Выводы. Уровни афамина в группе пациентов превосходят контрольную группу, вероятно, из-за компенсаторного механизма, вызванного возможным снижением уровня витамина Е и увеличением окислительного стресса. Наши результаты свидетельствуют о том, что генетические вариации афамина могут быть связаны с мужским и женским бесплодием.

START TYPING AND PRESS ENTER TO SEARCH